Chromatography ንጥረ ነገሮችን የመለያያ ዘዴዎች አንዱ ነው። ለቀጣይ የጥራት እና የቁጥር ትንተና የማይክሮ ፓርቲሎች አካላዊ እና ኬሚካላዊ ባህሪያት ጥቅም ላይ ይውላል. የዚህ ቴክኖሎጂ ልዩነት አፊኒቲ ክሮሞግራፊ ነው። የሞለኪውላር ትስስር ባህሪን በመጠቀም የፕሮቲን ውህዶችን የመለየት ሀሳብ በሳይንስ ውስጥ ለበርካታ አስርት ዓመታት ይታወቃል። ይሁን እንጂ እድገቱን ያገኘው በቅርብ ዓመታት ውስጥ ብቻ ነው, እንደ ማትሪክስ ጥቅም ላይ የሚውሉ በጣም የተቦረቦሩ የሃይድሮፊክ ቁሳቁሶችን ካስተዋወቁ በኋላ. ይህ ዘዴ ሁለቱንም የትንታኔ ችግሮች (የእቃዎችን መለያየት እና መለያቸው) እና የመሰናዶ ችግሮችን (ማጥራት፣ ትኩረት) ለመፍታት ያስችላል።
ማንነት
አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ (ከላቲን ቃል አፊኒስ - “አጎራባች”፣ “ተዛማጅ”) በቅርበት መስተጋብር ላይ የተመሰረተ ነው፣ እነዚህም በስፔሰር ሞለኪውል (ሊጋንድ ወይም አፊንታንት) እና በታላሚ ሞለኪውል መካከል ከፍተኛ ልዩ ትስስር መፍጠር ናቸው። እነዚህ ዘዴዎች በተፈጥሮ ውስጥ በጣም የተስፋፉ ናቸው (የአስታራቂዎች ግንኙነት ወይም ሆርሞኖች እና ተቀባይ ተቀባይ, ፀረ እንግዳ አካላት እናአንቲጂኖች, የ polynucleotides እና ሌሎች የሂደት ዓይነቶች ማዳቀል). በመድኃኒት ውስጥ፣ ከ1951 ጀምሮ አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ለተግባራዊ ዓላማዎች ጥቅም ላይ ውሏል
አካሎቹ በሚከተለው መልኩ ተለያይተዋል፡
- የሚገለለውን ንጥረ ነገር የያዘ መፍትሄ በሶርበንት በኩል ይተላለፋል፤
- በሶርበንት ማትሪክስ ላይ የተቀመጠው ሊጋንድ ይህንን ንጥረ ነገር ይይዛል፤
- የተከማቸ (መከማቸት) ነው፤
- የተለየውን ንጥረ ነገር በሟሟ በመታጠብ ከሶርበንት ማውጣት።
ይህ ዘዴ ሙሉ ሴሎችን እንዲለዩ ያስችልዎታል። ከተለምዷዊ የሶርፕሽን ክሮማቶግራፊ የሚለየው የገለልተኛ አካል ከ sorbent ጋር ጠንካራ የሆነ ባዮስፔሲፊክ ትስስር መኖሩ ነው፣ እሱም በከፍተኛ መራጭነት ይታወቃል።
Adsorbents
የሚከተሉት ንጥረ ነገሮች እንደ ማስታዎቂያዎች ያገለግላሉ፡
- Gel ውህዶች በአጋሮዝ ላይ የተመሰረቱ፣ ከአጋር የተገኘ ፖሊሳክካርዳይድ። በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉት 3 ዓይነት ናቸው፡ ሴፋሮዝ 4ቢ፣ CL (ከመስቀል ጋር የተያያዘ አጋሮዝ) እና አፊ-ጄል። የኋለኛው ጥንቅር የተሻሻለው የ agarose እና የ polyacrylamide ጄል ነው። የበለጠ ባዮሎጂካል ኢንቬስትመንት፣ ከፍተኛ ኬሚካላዊ እና የሙቀት መከላከያ አለው።
- ሲሊካ (ሲሊካ ጄል)።
- መስታወት።
- ኦርጋኒክ ፖሊመሮች።
በሊጋንድ ንክኪ ወቅት የሜካኒካል መሰናክሎችን ለማስወገድ ተጨማሪ ንጥረ ነገሮች ከአጓጓዡ (peptides, diamines, polyamines, oligosaccharides) ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላሉ።
መሳሪያ
አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ መሳሪያዎች የሚከተሉትን ዋና ክፍሎች ያካትታል፡
- የማጠራቀሚያ ታንኮች ለሞባይል ደረጃ (የለም)፤
- ከፍተኛ ግፊት ፓምፖች ለመካከለኛ አቅርቦት (ብዙውን ጊዜ የሚደጋገሙ)፤
- ማጣሪያዎችን ከአቧራ ለማፅዳት ፤
- የመጠጫ መሳሪያ፤
- ክሮማቶግራፊ አምድ ለየቅልቅል መለያየት፤
- ከአምዱ የሚወጡ ክፍሎችን የሚለየው ማወቂያ፤
- ክሮማቶግራም መቅረጫዎች እና ማይክሮፕሮሰሰር አሃድ (ኮምፒውተር)።
የተሟሟትን የአየር መጠን ለመቀነስ በመጀመሪያ ሂሊየም በሞባይል ደረጃ ውስጥ ያልፋል። የኤሌክትሮኒካዊውን ትኩረት ለመለወጥ, በፕሮግራም አውጪው ቁጥጥር ስር ያሉ በርካታ ፓምፖች ተጭነዋል. ክሮማቶግራፊክ አምዶች ከማይዝግ ብረት የተሰሩ ናቸው (ለዝገት መከላከያ ተጨማሪ መስፈርቶች) ፣ ብርጭቆ (ሁለንተናዊ አማራጭ) ወይም አክሬሊክስ። ለመሰናዶ ዓላማ ዲያሜትራቸው ከ2 እስከ 70 ሴ.ሜ ሊለያይ ይችላል።በመተንተን ክሮማቶግራፊ፣ ማይክሮ አምዶች Ø10-150 µm ጥቅም ላይ ይውላሉ።
የመመርመሪያዎችን ስሜት ለመጨመር ሬጀንቶች ወደ ድብልቅው ውስጥ እንዲገቡ ይደረጋሉ ይህም በአልትራቫዮሌት ወይም በሚታየው የስፔክትረም ክልል ውስጥ ብዙ ጨረሮችን የሚወስዱ ንጥረ ነገሮች እንዲፈጠሩ አስተዋፅኦ ያደርጋሉ።
ዘዴ
2 ዋና ዋና የፈሳሽ አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ ዓይነቶች አሉ፡
- አምድ፣ ዓምዱ በማይንቀሳቀስ ደረጃ ተሞልቶ ውህዱ በወራጅነት የሚያልፍበትብርሃን መለያየት በግፊት ወይም በስበት ኃይል ሊከሰት ይችላል።
- ቀጭን ንብርብር። ኤሊየንት በካፒላሪ ሃይሎች ተጽእኖ በጠፍጣፋው adsorbent ንብርብር ላይ ይንቀሳቀሳል. ማስታዎቂያው በመስታወት ሰሃን፣ ሴራሚክ ወይም ኳርትዝ ዘንግ፣ በብረት ፎይል ላይ ይተገበራል።
ዋና የሥራ ደረጃዎች የሚከተሉትን ያካትታሉ፡
- የአድሶርበንት ዝግጅት፣ የሊጋንድ ማጓጓዣው ላይ ማስተካከል፣
- የመለያየቱን ድብልቅ ወደ ክሮማቶግራፊ አምድ መመገብ፤
- የሞባይል ደረጃ መጫን፣ አካልን በሊጋንድ ማሰር፤
- የታሰረውን ንጥረ ነገር ለመለየት የደረጃ መተካት።
መዳረሻ
አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ የሚከተሉትን የንጥረ ነገር ዓይነቶች ለመለየት ይጠቅማል (ጥቅም ላይ የሚውለው ሊጋንዳ በቅንፍ ውስጥ ይገለጻል)፡
- የኢንዛይማቲክ አጋቾች፣ ተተኪዎች እና ተባባሪዎች (ኢንዛይሞች) ምሳሌዎች፤
- ባዮኦርጋኒክ ንጥረ ነገሮች የጄኔቲክ እንግዳነት ምልክቶች፣ ቫይረሶች እና ሴሎች (ፀረ እንግዳ አካላት) ምልክቶች ያላቸው፤
- ከፍተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ካርቦሃይድሬትስ፣ሞኖሳካራይድ ፖሊመሮች፣ glycoproteins (lectins)፤
- የኑክሌር ፕሮቲኖች፣ ኑክሊዮቲዲልትራንስፈሬዝ (ኑክሊክ አሲዶች)፤
- ተቀባይ፣ ፕሮቲኖችን (ቫይታሚን፣ ሆርሞኖችን) ማጓጓዝ፤
- ፕሮቲኖች ከሴል ሽፋኖች (ሴሎች) ጋር የሚገናኙ።
ይህ ቴክኖሎጂ የማይንቀሳቀሱ ኢንዛይሞችን ለማግኘትም የሚያገለግል ሲሆን ከሴሉሎስ ጋር ማገናኘት የበሽታ መከላከያ መድሃኒቶችን ለማምረት ያስችላል።
የዲኤንኤ ተያያዥ ፕሮቲኖች ክሮማቶግራፊ
ዲኤንኤ የሚገናኙ ፕሮቲኖችን ማግለል የሚከናወነው በመጠቀም ነው።ሄፓሪን. ይህ glycosaminoglycan ብዙ አይነት ሞለኪውሎችን ማሰር ይችላል። የዚህ ቡድን ፕሮቲኖች አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ እንደያሉ ንጥረ ነገሮችን ለመለየት ይጠቅማል።
- የትርጉም መነሻ እና ማራዘም ምክንያቶች (የኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎች እና ፕሮቲኖች ውህደት)፤
- የመገደብ (ኢንዛይሞች የተወሰኑ ቅደም ተከተሎችን በድርብ ባለ ገመድ ዲ ኤን ኤ ውስጥ የሚያውቁ)፤
- DNA ligases እና polymerases (የሁለት ሞለኪውሎች ውህደትን የሚያበረታቱ እና አዲስ ኬሚካላዊ ትስስር ለመፍጠር እና በዲኤንኤ መባዛት ውስጥ የሚሳተፉ ኢንዛይሞች)፤
- በበሽታ የመከላከል እና እብጠት ሂደቶች ውስጥ ትልቅ ሚና የሚጫወቱ ሴሪን ፕሮቲአዝ ኢንቫይረተሮች፤
- የእድገት ምክንያቶች፡ፋይብሮብላስት፣ሽዋንን፣ኢንዶቴልያል፤
- የሴሉላር ማትሪክስ ፕሮቲኖች፤
- ሆርሞን ተቀባይዎች፤
- Lipoproteins።
ክብር
ይህ ዘዴ ምላሽ ሰጪ ውህዶችን (ኢንዛይሞችን እና ትላልቅ ድምር - ቫይረሶችን) ለመለየት በጣም ልዩ ከሆኑት ውስጥ አንዱ ነው። ሆኖም ግን ባዮሎጂያዊ ንቁ ንጥረ ነገሮችን ለመለየት ብቻ አይደለም ጥቅም ላይ የሚውለው።
ፀረ እንግዳ አካላትን በትንሽ መጠን መለየት፣የፖሊአዲኒሊክ አሲድ መጠናዊ ግምገማ፣የድርቀት ሞለኪውላዊ ስብስቦችን በፍጥነት መወሰን፣የተወሰኑ ብክለትን ማስወገድ፣የማይሰራውን የትሪፕሲን አይነት ገቢር እንቅስቃሴን (kinetics) ጥናት፣የሰው ልጅ ሞለኪውላዊ መዋቅር ኢንተርፌሮን - ይህ ዝምድና ጥቅም ላይ የሚውልበት አጠቃላይ የጥናት ዝርዝር አይደለም chromatography. በክሊኒኩ ውስጥ ያለው ጥቅም እንደ፡ባሉ ጥቅሞቹ ምክንያት ነው።
- ውጤታማ የማጽዳት ችሎታፕሮቲኖች, ፖሊሶካካርዴ, ኑክሊክ አሲዶች. በአካላዊ እና ኬሚካላዊ ባህሪያቸው ትንሽ ይለያያሉ እና በሃይድሮሊሲስ ፣ በዲንቹሬትድ እና በሌሎች ሌሎች ዘዴዎች ጥቅም ላይ በሚውሉ የሕክምና ዓይነቶች ወቅት እንቅስቃሴን ያጣሉ ።
- የነገሮች መለያየት ፍጥነት፣የሂደቱ ተለዋዋጭ ባህሪ።
- ልዩ የኢንዛይም ማጥራት እና የኢሶኤንዛይም ግብረ-ሰዶማዊነት አያስፈልግም።
- የተለያዩ ንጥረ ነገሮችን መለየት ይችላል።
- የሊጋንዶች ዝቅተኛ ፍጆታ።
- ንጥረ ነገሮችን በከፍተኛ መጠን የመለየት እድሉ።
- የባዮሎጂካል ማክሮ ሞለኪውሎች ሊቀለበስ የሚችል ሂደት።
ይህ ዘዴ ከሌሎች ጋር ሊጣመር ይችላል፣ ተጨማሪ መስክ (ስበት፣ ኤሌክትሮማግኔቲክ) ለመጫን። ይህ የክሮማቶግራፊን ቴክኒካዊ ችሎታዎች ለማስፋት ያስችላል።
ኢንዛይማቲክ ምህንድስና
ለዚህ ዘዴ ምስጋና ይግባውና አዲስ የባዮቴክኖሎጂ ቅርንጫፍ - ኢንዛይም ምህንድስና ንቁ እድገት ተጀመረ።
Affinity chromatography ለ ኢንዛይም ማግለል የሚከተሉት ጥቅሞች አሉት፡
- ኢንዛይሞችን በብዛት በማግኘት ብዙ ጊዜ በመቀነስ ፣በዚህም ምክንያት - የዋጋ ቅነሳቸው ፤
- ኢንዛይሞችን አለመንቀሳቀስ በህክምና እና በኢንዱስትሪ ውስጥ ያላቸውን አተገባበር በእጅጉ ሊያሰፋው ይችላል፤
- የኢንዛይሞች ከማይሟሟ ጠንካራ ድጋፍ ጋር መገናኘታቸው የማይክሮ ህዋሳትን ተፅእኖ እና የምላሾችን አቅጣጫ ለማጥናት ያስችላል።
