ዳግመኛ ዲ ኤን ኤ በላብራቶሪ የጄኔቲክ ዳግም ማጣመር ቴክኒኮች የተፈጠሩ ዘረመል ከብዙ ምንጮች የተገኙ ሞለኪውሎች ናቸው። የሁሉም ፍጥረታት የዲኤንኤ ሞለኪውሎች ተመሳሳይ ኬሚካላዊ መዋቅር ስላላቸው እና በውስጡ ባለው ኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል ብቻ ስለሚለያዩ ሊሆን ይችላል።
ፍጥረት
ሞለኪውላር ክሎኒንግ የላብራቶሪ ሂደት ነው ድጋሚ ዲ ኤን ኤ ለመፍጠር። ከ polymerase chain reaction (PCR) ጋር በስፋት ጥቅም ላይ ከሚውሉት ሁለት ዘዴዎች አንዱ ነው. በተሞካሪው የተመረጠውን ማንኛውንም የተለየ የዲኤንኤ ቅደም ተከተል ማባዛትን እንዲቆጣጠሩ ያስችልዎታል።
በዲኤንኤ ዘዴዎች መካከል ሁለት መሠረታዊ ልዩነቶች አሉ። አንደኛው ሞለኪውላር ክሎኒንግ በህያው ሴል ውስጥ ማባዛትን የሚያካትት ሲሆን PCR ደግሞ በብልቃጥ ውስጥ ያካትታል. ሌላው ልዩነት የመጀመሪያው ዘዴ የዲኤንኤ ቅደም ተከተሎችን መቁረጥ እና መለጠፍ ያስችላል, ሁለተኛው ደግሞ ያለውን ቅደም ተከተል በመኮረጅ ይሻሻላል.
Vector DNA
ዳግም የሚዋሃድ ዲኤንኤ ለማግኘት ክሎኒንግ ቬክተር ያስፈልገዋል። ከፕላስሚዶች ወይም ቫይረሶች የተገኘ ሲሆን በአንጻራዊነት ትንሽ ክፍል ነው. ለሞለኪውላር ክሎኒንግ የቬክተር ምርጫ የሚወሰነው በአስተናጋጅ ኦርጋኒክ ምርጫ, የዲ ኤን ኤው መጠን እንዲቀለበስ እና የውጭ ሞለኪውሎች እንዲገለጹ ነው. ክፍሎችን እንደ ገደብ ኢንዛይም/ሊጋዝ ክሎኒንግ ወይም ጊብሰን መገጣጠሚያን በመጠቀም የተለያዩ ዘዴዎችን በመጠቀም ሊጣመር ይችላል።
ክሎኒንግ
በመደበኛ ፕሮቶኮሎች ክሎኒንግ ሰባት ደረጃዎችን ያካትታል።
- የአስተናጋጅ አካል እና ክሎኒንግ ቬክተር ይምረጡ።
- የዲኤንኤ ቬክተር ማግኘት።
- የተከለለ ዲ ኤን ኤ መፈጠር።
- ዳግም የሚዋሃድ ዲኤንኤ መፍጠር።
- ወደ አስተናጋጅ አካል በማስተዋወቅ ላይ።
- የያዙት ፍጥረታት ምርጫ።
- የክሎኖች ምርጫ ከተፈለገ የዲኤንኤ ማስገቢያዎች እና ባዮሎጂካል ባህሪያት።
ወደ አስተናጋጅ አካል ከተተከለ በኋላ፣ በዳግም ውህደት ውስጥ ያሉት የውጭ ሞለኪውሎች ሊገለጹ ወይም ላይገለጹ ይችላሉ። አገላለጽ ለዲኤንኤ ምርት አስፈላጊ የሆኑትን ቅደም ተከተሎች ለማካተት የጂንን መልሶ ማዋቀር ይጠይቃል። በአስተናጋጁ የትርጉም ማሽን ጥቅም ላይ እየዋለ ነው።
እንዴት እንደሚሰራ
Recombinant DNA የሚሰራው አስተናጋጁ ሴል ከዳግም ጂኖች የተገኘ ፕሮቲን ሲገልጽ ነው። አገላለጽ የሚወሰነው ለጽሑፍ ግልባጭ መመሪያ በሚሰጡ የምልክት ስብስብ ጂን ዙሪያ ነው። አስተዋዋቂ፣ ራይቦዞም ማሰሪያ እና ተርሚነተር ያካትታሉ።
ችግሮች የሚፈጠሩት ጂን ከሆነ ነው።ለባክቴሪያ አስተናጋጅ እንደ ማቋረጫ የሚያገለግሉ ኢንትሮኖች ወይም ምልክቶችን ይዟል። ይህ ያለጊዜው መቋረጥን ያስከትላል። ዳግም የተዋሃደ ፕሮቲን አላግባብ ሊሰራ፣ ሊታጠፍ ወይም ሊበላሽ ይችላል። በ eukaryotic ስርዓቶች ውስጥ ያለው ምርት በአብዛኛው የሚከሰተው በእርሾዎች እና በፋይል ፈንገሶች ውስጥ ነው. ለብዙዎች ጠንካራ ደጋፊ ወለል ስለሚያስፈልገው የእንስሳት መያዣዎችን መጠቀም ከባድ ነው።
የህዋሳት ባህሪያት
የዲኤንኤ ሞለኪውሎች የሚቀላቀሉት ኦርጋኒዝም መደበኛ ፍኖተ-ዓይነት አላቸው። መልካቸው፣ ባህሪያቸው እና ሜታቦሊዝም አብዛኛውን ጊዜ አይለወጡም። የድጋሚ ቅደም ተከተሎች መኖራቸውን ለማሳየት ብቸኛው መንገድ የ polymerase chain reaction test በመጠቀም ዲ ኤን ኤውን መመርመር ነው።
በአንዳንድ ሁኔታዎች፣ recombinant DNA ጎጂ ውጤቶች ሊኖሩት ይችላል። ይህ ሊሆን የሚችለው ገባሪ አራማጅ ያለው ስብርባሪው ከዚህ ቀደም ጸጥተኛ ከሆነው አስተናጋጅ ሴል ጂን አጠገብ ሲገኝ ነው።
ተጠቀም
Recombinant DNA ቴክኖሎጂ በባዮቴክኖሎጂ፣ህክምና እና ምርምር በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል። ፕሮቲኖች እና ሌሎች ምርቶች በሁሉም ምዕራባውያን ፋርማሲዎች ፣ የእንስሳት ህክምና ክሊኒክ ፣የዶክተር ቢሮ ፣የህክምና ወይም ባዮሎጂካል ላብራቶሪ ውስጥ ይገኛሉ።
በጣም የተለመደው አፕሊኬሽን በመሠረታዊ ጥናት ውስጥ ነው፣ ቴክኖሎጂ ለአብዛኛው የዛሬው በባዮሎጂካል እና ባዮሜዲካል ሳይንሶች ውስጥ አስፈላጊ ነው። ድጋሚ ዲ ኤን ኤ ጂኖችን ለመለየት፣ ካርታ እና ቅደም ተከተል ለመስጠት እና እነሱን ለመወሰን ይጠቅማልተግባራት. የ rDNA መመርመሪያዎች በነጠላ ሴሎች ውስጥ እና በአጠቃላይ ፍጥረታት ሕብረ ሕዋሳት ውስጥ የጂን አገላለጽ ለመተንተን ያገለግላሉ። የላቦራቶሪ ሙከራዎች ውስጥ recombinant ፕሮቲኖች reagents ሆነው ጥቅም ላይ ይውላሉ. አንዳንድ የተወሰኑ ምሳሌዎች ከዚህ በታች ተሰጥተዋል።
ዳግመኛ ቺሞሲን
በአቦማሱም የተገኘ ቺሞሲን አይብ ለመስራት የሚያስፈልገው ኢንዛይም ነው። በኢንዱስትሪው ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው የመጀመሪያው በዘረመል የተሻሻለ የምግብ ተጨማሪዎች ነበር። በማይክሮባዮሎጂ የሚመረተው ድጋሚ ውህድ ኢንዛይም መዋቅራዊ በሆነ መልኩ ከጥጃው ኢንዛይም ጋር ተመሳሳይነት ያለው ርካሽ እና በብዛት የሚመረተው ነው።
ዳግመኛ የሰው ኢንሱሊን
በኢንሱሊን ላይ የተመሰረተ የስኳር በሽታን ለማከም ከእንስሳት ምንጭ (ለምሳሌ ከአሳማ እና ከብት) የሚገኘውን ኢንሱሊን ይተካል። ዳግመኛ ኢንሱሊን የሚዋሃደው የሰውን ኢንሱሊን ጂን ወደ ኢቴሪቺያ ወይም እርሾ ባክቴሪያ በማስተዋወቅ ነው።
የእድገት ሆርሞን
የመደበኛ እድገትን ለመደገፍ ፒቱታሪ ግራንት በቂ የእድገት ሆርሞን ለማያመርት ለታካሚዎች የታዘዘ ነው። ዳግም የተዋሃደ የእድገት ሆርሞን ከመገኘቱ በፊት የተገኘው ከካዳቨር ፒቱታሪ ግራንት ነው። ይህ ደህንነቱ ያልተጠበቀ አሰራር አንዳንድ ታካሚዎች የክሪዝፌልድት-ጃኮብ በሽታ እንዲይዙ አድርጓቸዋል።
ዳግመኛ የደም መርጋት ምክንያት
ይህ የደም መፍሰስ ችግር ላለባቸው በሽተኞች የሚተዳደር ደም የሚያስተካክል ፕሮቲን ነው። ማምረት አይችሉምፋክተር VIII በበቂ መጠን። ዳግመኛ ፋክተር VIII ከመፈጠሩ በፊት ፕሮቲን የተሰራው ከብዙ ለጋሾች ከፍተኛ መጠን ያለው የሰው ደም በማቀነባበር ነው። ይህ ተላላፊ በሽታዎችን የመተላለፍ ዕድሉ ከፍተኛ ነው።
የኤችአይቪ ኢንፌክሽን ምርመራ
የኤችአይቪ ኢንፌክሽንን ለመመርመር በሰፊው ጥቅም ላይ ከዋሉት ሦስቱ ዘዴዎች ውስጥ እያንዳንዱ የተሰራው በዲኤንኤ (Recombinant DNA) ነው። የፀረ-ሰው ምርመራ ፕሮቲን ይጠቀማል. የተገላቢጦሽ ግልባጭ ፖሊሜሬሴን ሰንሰለት ምላሽን በመጠቀም የኤችአይቪ ጄኔቲክ ቁስ መኖሩን ያውቃል። የፈተናው እድገት የተቻለው በሞለኪውላር ክሎኒንግ እና በኤች አይ ቪ ጂኖም ቅደም ተከተል ነው።
