PCR ወይም polymerase chain reaction በህክምና እና በሌሎች ሳይንሳዊ ዘርፎች በስፋት ጥቅም ላይ የሚውል የተራቀቀ የላብራቶሪ ዘዴ ነው። PCR ዲያግኖስቲክስ በአንድ ወቅት በሳይንስ ውስጥ እውነተኛ ግኝት ሆነ።
መግለጫ
Quantitative PCR የእውነተኛ ጊዜ PCR አይነት ነው።
ይህ እንደ PCR ተለዋጭ ተረድቷል፣ የምላሽ እንቅስቃሴው በቋሚነት የሚመዘገብበት፣ ይህም የተወሰኑ የዲኤንኤ ኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተሎችን ይዘት በተወሳሰበ ሞለኪውላዊ ድብልቅ ውስጥ በጥራት ለመገምገም ያስችላል።
Quantitative PCR ዘዴ ከዚህ በታች በበለጠ ዝርዝር ይብራራል።
የመተንተን ፍሬ ነገር
ባህላዊ እና ሴሮሎጂካል ዘዴዎች በተለይም ኢንፌክሽኑን ለመለየት ብዙ ጊዜ ጥቅም ላይ ይውላሉ። በመጀመሪያው ስር በደም ሴረም ውስጥ ተላላፊ በሽታ አምጪ ተህዋስያን ፀረ እንግዳ አካላት ተወስነዋል. በሁለተኛው ውስጥ, ከታመመ ሰው የተወሰደው ባዮሎጂያዊ ቁሳቁስ በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ለማዳበር ተስማሚ የሆነ ልዩ ልዩ ዘዴን ለመዝራት ያገለግላል. በሁለቱም ውስጥ ምርመራዎችጉዳዩ ቀናት ወይም ሳምንታት ሊቆይ ይችላል።
የ PCR ምርመራ ከበሽተኛ በተገኙ የተለያዩ ባዮሎጂካል ቁሶች ሊደረግ ይችላል። ደም እና ሌሎች ፓዮሎጂካል, ፊዚዮሎጂያዊ እና ባዮሎጂካል ሚዲያዎች እና ፈሳሾች እንደ ናሙናዎች ይሠራሉ. PCR ሰገራ ወይም ሽንት ማድረግ ትችላለህ።
አይነት እና የቫይረስ ኢንፌክሽኖች በብዛት የሚመረመሩት በቁጥር PCR ነው፣ምክንያቱም በእነሱ በተቀሰቀሱት የፓቶሎጂ ሂደት ልዩ ባህሪ ምክንያት ለመመርመር ቀላል ላይሆን ይችላል። እንዲህ ያሉ ኢንፌክሽኖችን ለመወሰን ጊዜ ይወስዳል, በዚህ ጊዜ ፀረ እንግዳ አካላት በሰውነት ውስጥ መፈጠር ይጀምራሉ, በሴሮሎጂካል ዘዴዎች ይወሰናል. ግን ይህ በአንዳንድ ሁኔታዎች ተቀባይነት የለውም።
የማስፈጸሚያ ዘዴ
PCR ዘዴ - ከበሽተኛው (በብልቃጥ ውስጥ) በተለዩ ናሙናዎች ውስጥ የላብራቶሪ ኢንፌክሽን መለየት።
የፖሊሜራዝ ሰንሰለት ምላሽን ለማካሄድ የልዩ ሬጀንቶች ስብስብ ያስፈልጋል።
የሙከራ ቁሳቁሱ ወደ መሞከሪያ ቱቦዎች ከሪኤጀንቶች ጋር ገብቷል። የሙከራ ቱቦዎች በልዩ መሳሪያዎች ውስጥ ይቀመጣሉ - PCR ማጉያ, ተፈላጊውን የአር ኤን ኤ ወይም ዲ ኤን ኤ ቁርጥራጮችን ለመጨመር (ቁጥሩን ለመጨመር) የተነደፈ, PCR ማጉያው በሳይክል ሁነታ ይሰራል. በማናቸውም ዑደት ውስጥ, ናሙናዎቹ የባክቴሪያውን አር ኤን ኤ ወይም ዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል ካካተቱ, የእነዚህ ኑክሊክ አሲዶች ተጨማሪ ቅጂዎች በመፍትሔው ውስጥ ይሰበስባሉ. በሽታ አምጪ ተህዋሲያን መኖሩን እና መጠኑን በናሙናዎቹ ውስጥ ማወቅ ይችላሉ።
የ PCR አይነቶች
ጥራት ያለው ትንተና በ PCR የሚከተለውን ውጤት እንድታገኙ ይፈቅድልሃል፡
- አሉታዊ የፍላጎት በሽታ አምጪ ተህዋሲያን በናሙናዎቹ ውስጥ ካልተገኘ፤
- በናሙናዎቹ ውስጥ የአንድ የተወሰነ በሽታ አምጪ ባህሪ ያላቸው ቅደም ተከተሎች ከተገኙ አዎንታዊ።
በአዎንታዊ PCR ውጤት 95% በትክክል ስለተረጋገጠ ኢንፌክሽን መኖር መናገር እንችላለን። በተመሳሳይ ጊዜ፣ ለምርመራ ዓላማ የሚያገለግሉ የ PCR ስብስቦች ትክክለኛነት 100% ይደርሳል።
በተለምዶ 5% የሚሆኑት የተሳሳቱ ውጤቶች የሚወሰኑት በሰው ልጅ ምክንያት ነው። ለምሳሌ የሪኤጀንቶችን የመተንተን እና የማጠራቀሚያ ቴክኒኮችን መጣስ የጥናቱ ትክክለኛነት በእጅጉ ይቀንሳል።
Quantitative PCR የቫይራል ሎድ ጽንሰ-ሀሳብን ይገልፃል። ከታካሚው በተወሰዱ ናሙናዎች ውስጥ ስንት በሽታ አምጪ ዲ ኤን ኤ ስብስቦች እንደነበሩ ማወቅ ይቻላል።
የኢንፌክሽኑ ክብደት ከቁጥራቸው መጨመር ጋር በቀጥታ ተመጣጣኝ ነው። እንዲሁም የቫይራል ጭነትን ለመቀነስ የሕክምናውን ስኬት ማወቅ ይችላሉ።
ማስረከቢያ ለ PCR ባዮማቴሪያል
Quantitative PCR በክሊኒኩ ውስጥ በተለይም በማለዳ ይከናወናል። ሐኪሙን በሚጎበኙበት ጊዜ በሽተኛው ምን መውሰድ እንዳለበት ይነገራል: መቧጠጥ, ስሚር, ሽንት ወይም ደም. PCR የቁሱ የብክለት ደረጃ ምንም ይሁን ምን በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን መለየት ይችላል።
ለአዎንታዊ ትንተና፣ በንድፈ ሀሳብ፣ በናሙናዎቹ ውስጥ አንድ በሽታ አምጪ ተህዋስያን መኖር ያስፈልጋል። በተግባር, የበለጠ ምቹ ሁኔታዎችን ለመፍጠር ይሞክራሉ. ለዚህ አንዳንድ ምክሮች አሉ፡
- ከጾታ ብልት ላይ መፋቅ ወይም መፋቅ ከወሰዱየአካል ክፍሎች ጥናቱ ከመደረጉ ከሶስት ቀናት በፊት ከግንኙነት መቆጠብ ያስፈልግዎታል፤
- በፀረ-ባክቴሪያ መድሐኒት ማሸት ወይም ከመተንተን በፊት ራስዎን መታጠብ አይችሉም፤
- ከሽንት ቱቦ ስሚር ከመውሰዳችሁ ከሶስት ሰአት በፊት ታጋሽ መሆን እና አንጀትዎን ባዶ ማድረግ አለቦት።
ደም ሲለግሱ እነዚህን ህጎች አይከተሉ።
የቁጥር PCR ትንተና ውጤቶች እንዴት ይተረጎማሉ?
የተገኙ ውጤቶች የቁጥር ግምገማ
በበርካታ ክሊኒካዊ ሁኔታዎች ውስጥ, የሕክምናው ውጤታማነት እና / ወይም የፓቶሎጂ ሂደት ተለዋዋጭነት ችግር ይታያል. እንደዚህ ያሉ ጥያቄዎች በተለይ ሥር የሰደደ ኢንፌክሽን ያለባቸውን ሰዎች (የሰው ልጅ የበሽታ መከላከያ ቫይረስ, ሄፓታይተስ ቢ እና ሲ) ሲመረመሩ ጠቃሚ ናቸው. ምርመራ በሚደረግበት ጊዜ የአምፕሊኮን (PCR ምርቶች) ክምችት በተተነተነው ናሙና ውስጥ የተፈለገውን የጂን ቅጂዎች ከመገኘቱ ጋር ተመጣጣኝ ነው በሚለው እውነታ ላይ የተመሰረቱ ናቸው.
በእርግጥ የቁጥር PCR ውጤቶችን ከግምት ውስጥ በማስገባት ልዩ PCR ምልክቶችን ጥንካሬ በማጥናት በጄል ኤሌክትሮፊዮርስስ ይከናወናል. እንዲሁም ለተገኘው ውጤት ትክክለኛ አሃዛዊ ግምገማ ቅድመ ሁኔታ ተፈላጊው የጂን ቅጂዎች (ለምሳሌ ፣ አንድ ሺህ የሄፐታይተስ ሲ ጂን ለአንድ PCR ምላሽ) የያዙ አወንታዊ አስተማማኝ የቁጥጥር ናሙናዎች ናቸው። የቁጥር መቆጣጠሪያው በርካታ ተከታታይ ማሟያዎች የመለኪያ ኩርባዎች እንዲፈጠሩ ያስችላቸዋል እና የክሊኒካዊ ጂኖኮፒዎችን ይዘት በክሊኒካዊ ናሙናዎች ለመገምገም ያገለግላሉ።
በቁጥር PCR ትርጉም ቁልፍ ስኬት መፍጠር ነው።የፍሎረሰንት ዲ ኤን ኤ መመርመሪያዎች ወደ ምላሽ ድብልቅ በአንድ ጊዜ ከቀላል ፕሪመርሮች ጋር የሚጨመሩ እና የ PCR ሂደቱን በጊዜ እንዲከታተሉ ያስችሉዎታል ማለትም የእውነተኛ ጊዜ PCR።
የTaqMan ዘዴ የሚያመለክተው ለአምፕሊኮን መካከለኛ ክፍል የተወሰኑ እና ሁለት መለያዎች ያሉት የፍሎረሰንት ዲ ኤን ኤ መመርመሪያዎችን ውህደት ነው። ከመካከላቸው አንዱ የፍሎረሰንት መለያ ነው፣ ሁለተኛው ለዚህ ፍሎረሰንት የሚያጠፋ ሞለኪውል ነው።
የፍሎራይሜትር ድቅል እና ቴርሞብሎክ-አምፕሊፋየር የሆነ ልዩ መሣሪያ በእያንዳንዱ የሙከራ ቱቦ ውስጥ የማያቋርጥ የፍሎረሰንት መለኪያዎችን ያደርጋል (በእውነተኛ ጊዜ PCR መርህ)። ከ 20-40 ዑደቶች PCR በኋላ ለእያንዳንዱ ናሙና የግለሰብ ኩርባዎች ያገኛሉ. በሙከራ ናሙና ውስጥ ያለው ተፈላጊው ዘረ-መል (ጅን) ቅጂዎች ቁጥር ከቁጥጥር ናሙናዎች ጋር ከካሊብሬሽን ኩርባዎች ሊሰላ ይችላል።
እንዲሁም የPCR ትግበራ በፍሎረሰንት ዘዴ ያለው ጠቃሚ ባህሪ ውጤቱን ከግምት ውስጥ በማስገባት ከ PCR ድብልቅ ጋር ቱቦዎችን መክፈት አያስፈልግም። ይህ በማጉላት ምርቶች ክፍሉን የመበከል እድልን ይቀንሳል, እና ለኤሌክትሮፊዮሬሲስ ልዩ የስራ ቦታዎችን መመደብ አያስፈልግም.
የ PCR አሃዛዊ ግልባጭ ምን ያሳያል?
ምን ተገኘ?
እንደ አሃዛዊ PCR በመሳሰሉት ዘዴ በጂኖች ላይ ያሉ የጥራት ለውጦች ይገኛሉ፡- ማስገባት፣ ስረዛ እና የነጥብ ሚውቴሽን። ነገር ግን ከአንዳንድ በዘር የሚተላለፉ በሽታዎች፣ ተጓዳኝ ምልክቶች የሚታዩት በተወሰኑ ጂኖች ይዘት ላይ ለውጥ ምክንያት ነው።
እናመሰግናለን።የቁጥር ትንተና ብዙ ጊዜ በ IU / ml ውስጥ የቁጥር ውጤት ይሰጣል። ይህ ማለት በአንድ ሚሊሊትር የሙከራ ናሙና ውስጥ በአለም አቀፍ አሃዶች የሚለኩ የተወሰኑ የ RNA ወይም DNA ቅጂዎች ተገኝተዋል።
እንደ መጠኑ መጠን የኢንፌክሽኑ ክብደት በምርመራ ይታወቃል። በህመም ጊዜ ቫይረሶች በደም ውስጥ በነፃነት ስለሚንቀሳቀሱ የቫይራል ሎድን ለማወቅ ብዙውን ጊዜ ደም ይመረመራል።
ባህሪዎች
የደም ምርመራ የቁጥር PCR ሁለት ባህሪያት አሉት።
- ትንታኔው የሚካሄደው ፕሪመር ወይም ዲኦክሲራይቦኑክሊዮሳይድ ትሪፎፌስ ባሉበት ሲሆን እነዚህም በፍሎረሰንት ወይም በራዲዮአክቲቭ መለያ የተለጠፈ የPCR ምርትን ይዘት በትክክል ለማወቅ።
- በ PCR ሂደት ውስጥ ብዙ PCR ምርቶች ከመታየታቸው በፊት ምላሹን ቀድመው ያቁሙ። ይህ የሆነበት ምክንያት በመጨረሻው የሙሌት ደረጃ ላይ ፣ ብዙ PCR ምርቶች በሚኖሩበት ጊዜ ፣ ሁለቱም ኢንዛይሞች እና ንጣፎች የዚህ ምላሽ መገደብ አገናኞች ሆነው ያገለግላሉ። በእንደዚህ ያሉ ሁኔታዎች ውስጥ የሚቀጥለው የ PCR ዑደት መጨረሻ ከአሁን በኋላ የ PCR ምርቶች ብዛት በእጥፍ አይታወቅም ፣ በተለያዩ ናሙናዎች መካከል ጉልህ ያልሆኑ የቁጥር ልዩነቶች ተስተካክለዋል ፣ ይህም በተከታታይ የምላሽ ዑደቶች ውስጥ ካለፉ በኋላ በመጀመሪያዎቹ ደረጃዎች ውስጥ በግልጽ ይገለጻል ።.
የ PCR ምርመራዎች ዋጋ
PCR ምርምር ዋጋ አለው፣ ይህም በምን አይነት ኢንፌክሽን እንደሚመረመር፣ በመተንተን ዘዴ እና በፈተና ቁሳቁስ ላይ የተመሰረተ ነው። አንድ ኢንፌክሽን ለመወሰን, በውስጡ መስጠት አለብዎት200-800 ሩብልስ. ባዮሜትሪ ለመውሰድ ክፍያ እንዲሁ ተጨምሯል - በግምት 400 ሩብልስ።
