Flow ሳይቶሜትሪ ለሴሎች ጥልቅ ትንተና የሚያገለግል የሳይቶሎጂ ጥናት ዘዴ ነው። የእሱ ጥቅም እያንዳንዱን ሕዋስ በተናጥል እንዲያጠኑ ይፈቅድልዎታል. ይህ ዓይነቱ ትንተና በሰከንዶች ውስጥ በመቶዎች በሚቆጠሩ ሴሎች ውስጥ በርካታ መለኪያዎችን ለመገምገም ይረዳል. በዚህ ምክንያት ሳይቶፍሎሪሜትሪ በአሁኑ ጊዜ ለሳይንቲስቶች እና ክሊኒኮች ካሉት በጣም ፈጣኑ እና ትክክለኛ የመተንተን ዘዴዎች አንዱ ነው ተብሎ ይታሰባል።
መርህ
የፍሰት ሳይቶሜትሪ መርህ በብርሃን መበታተን እና በብርሃን (ፍሎረሰንት) ሕዋሳት መለኪያ ላይ የተመሰረተ ነው። የሕዋስ እገዳው በከፍተኛ ፍጥነት በሳይቶሜትር ሴል በኩል እንደ ዥረት ይተላለፋል, እሱም በሌዘር ይለቀቃል. የሃይድሮዳይናሚክ ትኩረት ተብሎ የሚጠራው እዚያም ይከናወናል. የእሱ አሠራር በሴሉ ውስጥ ከተጠኑት ቅንጣቶች ጋር ከሴሉ የሚወጣው ፍሰት ከፍተኛ ፍጥነት ባለው ውጫዊ ጄት ውስጥ እንዲፈስ ማድረግ ነው. በውጤቱም፣ ቅንጣቶች በታዘዘ ሰንሰለት ውስጥ ተሰልፈዋል።
ቅድመ-ሕዋሳት በልዩ የፍሎረሰንት ማቅለሚያዎች (fluorochromes) ምልክት ተደርጎባቸዋል። ለእነሱ ምስጋና ይግባውና የጨረር ጨረርሁለተኛ ብርሃንን ያበረታታል። የተቀበሉት የብርሃን ምልክቶች በፈላጊዎች የተመዘገቡ ናቸው. በመቀጠል፣ መረጃው በአንዳንድ መመዘኛዎች የሚለያዩ የነጠላ ሴሎችን ቁጥር ለመቁጠር የሚያስችልዎትን የሶፍትዌር ስልተ ቀመሮችን በመጠቀም ይካሄዳል።
በተለምዶ በአጉሊ መነጽር የተደረገ ጥናት ብዙ ጊዜ የተለያዩ ህዋሶች ተመሳሳይ ስለሚመስሉ መለየት ይሳነዋል። ሳይቶፍሎሪሜትሪ ሌሎች መረጃዎችን (የዲ ኤን ኤ መዋቅር ታማኝነት)፣ የፕሮቲን አገላለጽን፣ የሕዋስ ሕልውናን መተንተን ይችላል።
የፍሎሮክሮም መነቃቃት የተለያየ የሞገድ ርዝመት ያላቸውን የብርሃን ጨረሮች እንዲሁም የተለያዩ አይነት መመርመሪያዎችን ስለሚፈልግ ዘመናዊ ተከላዎች በበርካታ የፍተሻ ቻናሎች (ከ4 እስከ 30) የታጠቁ ናቸው። የሌዘር ጨረሮች ብዛት ከ1 እስከ 7 ሊሆን ይችላል። ይበልጥ ውስብስብ የሆኑ መሳሪያዎች ባለብዙ ፓራሜትር በአንድ ጊዜ የበርካታ የንጥረ ነገሮችን ባህሪያት በአንድ ጊዜ እንዲያጠና ይፈቅዳሉ።
ጥቅሞች እና ጉዳቶች
የፍሰት ሳይቶሜትሪ ጥቅሞች የሚከተሉትን ያካትታሉ፡
- ከፍተኛ የማቀነባበሪያ ፍጥነት (እስከ 30 ሺህ ክስተቶች በ1 ሰከንድ ውስጥ መመዝገብ)፤
- የሴሎች ብዛት ለማጥናት የሚቻል (በናሙና እስከ 100 ሚሊዮን)፤
- የፍሎረሰንት መብራትን መጠን በመለካት፤
- የእያንዳንዱ ሕዋስ ትንተና፤
- በተለያዩ ሂደቶች ላይ በአንድ ጊዜ ጥናት፤
- ውሂብን በራስ ሰር መለያየት በሕዋስ ህዝብ፤
- የጥራት ምስላዊ የውጤቶች።
ሌላው የዚህ ቴክኖሎጂ ባህሪ ነው።የተተነተነው ቅንጣት በበርካታ የፍሎረሰንት መፍትሄዎች ሊበከል ይችላል. ለዚህም ምስጋና ይግባውና የባለብዙ መለኪያ ጥናት ይከሰታል።
ጉዳቶቹ የቴክኒካዊ መሳሪያው ውስብስብነት እና የልዩ ናሙና ዝግጅት አስፈላጊነት ያካትታሉ።
ሳይቶሜትሮች
የመጀመሪያዎቹ መሣሪያዎች በ1968 በጀርመን ታዩ፣ነገር ግን በጣም ቆይተው ተስፋፍተዋል። በአሁኑ ጊዜ በፍሰት ሳይቶሜትሪ ዘዴ የሚሰሩ ሁሉም መሳሪያዎች በ 2 ዓይነቶች ሊከፈሉ ይችላሉ፡
- የፍሎረሰንት ጨረር (ሁለት ወይም ከዚያ በላይ የሞገድ ርዝመቶች)፣ 10° እና 90° የብርሃን መበታተን (ዝቅተኛ አንግል እና የጎን መበታተን) የሚለኩ መሳሪያዎች፤
- መሳሪያዎች፣ በርካታ ሴሉላር መለኪያዎችን ከመለካት በተጨማሪ፣ በእነዚህ መመዘኛዎች መሰረት በራስ-ሰር በቡድን የሚከፋፈሉ ናቸው።
ወደ ፊት የሚበተን ማወቂያ የሕዋሱን መጠን ለመወሰን የተነደፈ ሲሆን የጎን መበተን መሳሪያው ስለ ሴሉላር ግራኑሎች፣ የሳይቶፕላዝም መጠን እና የኒውክሊየስ መጠን መረጃን ለማግኘት ያስችላል።
ክላሲክ ሳይቶሜትሮች ከብርሃን ማይክሮስኮፖች በተለየ የሕዋስ ምስል ለማግኘት አይፈቅዱም። ይሁን እንጂ በቅርብ ዓመታት ውስጥ የማይክሮስኮፕ እና የሳይቶፍሎራይሜትር አቅምን ለማጣመር የሚያስችሉ የተዋሃዱ መሳሪያዎች ተዘጋጅተዋል. ከዚህ በታች ይወያያሉ።
Imaging Cytometers
በክላሲካል ፍሰት ሳይቶሜትሪ ለሚጠቀሙ መሳሪያዎች፣አንዱ ባህሪይ ነው፡- ብርቅዬ ክስተቶች በተተነተኑ ህዋሶች ውስጥ ከተመዘገቡ፣ ምንነት ምን እንደሆነ ለመገምገም ምንም አይነት መንገድ የለም። እነዚህ ቅንጣቶች የሞቱ ሴሎች ቅሪቶች ወይም የእነርሱ ብርቅዬ ቡድን ሊሆኑ ይችላሉ። በተለመዱ መሳሪያዎች ውስጥ እንደዚህ ያሉ መረጃዎች ከአጠቃላይ የዝግጅቱ ፍሰት የተገለሉ ናቸው, ነገር ግን ለሳይንሳዊ እና ክሊኒካዊ ትንታኔዎች ልዩ ዋጋ ሊኖራቸው የሚችሉት እነሱ ናቸው.
አዲሱ ትውልድ የኢሜጂንግ ፍሰት ሳይቶሜትሮች የእያንዳንዱን ሕዋስ በፈላጊ ዞኑ ውስጥ በሚያልፉበት ጊዜ ምስል እንዲይዙ ያስችልዎታል። በኮምፒዩተር ሞኒተር ላይ የሚታየውን የስዕላዊ መግለጫውን ተዛማጅ ቦታ ጠቅ በማድረግ በቀላሉ ማየት ይቻላል ።
የመተግበሪያ አካባቢዎች
Flow ሳይቶሜትሪ በብዙ የመድኃኒትና የሳይንስ ዘርፎች የሚያገለግል ሁለንተናዊ ዘዴ ነው፡
- immunology፤
- ኦንኮሎጂ፤
- transplantology (የቀይ አጥንት መቅኒ፣ የሴል ሴሎች መተካት)፤
- ሄማቶሎጂ፤
- ቶክሲኮሎጂ፤
- ባዮኬሚስትሪ (በሴል ውስጥ ያለውን የአሲድነት መጠን መለካት፣የሌሎች መለኪያዎች ጥናት)፤
- ፋርማኮሎጂ (አዲስ መድኃኒቶችን መፍጠር)፤
- ማይክሮባዮሎጂ፤
- ፓራሲቶሎጂ እና ቫይሮሎጂ፤
- የውቅያኖስ ጥናት (የውሃ አካላትን እና ሌሎች ተግባራትን ሁኔታ ለመገምገም የፋይቶፕላንክተን ጥናት);
- ናኖቴክኖሎጂ እና የማይክሮ ፓርቲካል ትንተና።
Immunology
የሰው ልጅ በሽታ የመከላከል ስርዓት የተለያዩ አይነት ህዋሶችን ያቀፈ ነው። በኢሚውኖሎጂ ውስጥ ፍሰት ሳይቶሜትሪ አወቃቀራቸውን እና ተግባራቸውን ለመገምገም ያስችለዋል ፣ ማለትም ፣ morphofunctional ለማከናወን።ትንታኔ።
እንዲህ ዓይነቱ ምርምር የበሽታ መከላከልን ውስብስብ ተፈጥሮ ለመረዳት ይረዳል። አንቲጂኖች በማንቃት ፣ የፓቶሎጂ እድገት እና ሌሎች ምክንያቶች የተነሳ የሕዋስ ፍኖታይፕስ ይለወጣሉ። ሳይቶፍሎሮሜትሪ የበሽታ ተከላካይ ሕዋሳትን በተዋሃደ ድብልቅ ውስጥ በመለየት ሁሉንም ለውጦች በጊዜ ሂደት ይገመግማል።
ኦንኮሎጂ
በኦንኮሎጂ ውስጥ በጣም አስፈላጊ ከሆኑ ተግባራት ውስጥ አንዱ የሴሎች እንደየአይነታቸው መለያየት ነው። በኦንኮሄማቶሎጂ ውስጥ በፍሰት ሳይቶሜትሪ የመተንተን መርህ በሚከተለው ክስተት ላይ የተመሠረተ ነው-ናሙና በልዩ የፍሎረሰንት ቀለም ሲታከም ከሳይቶፕላስሚክ ፕሮቲኖች ጋር ይያያዛል። በንቃት በሚባዙ ሴሎች ውስጥ ከተከፋፈለ በኋላ ይዘቱ በግማሽ ይቀንሳል። በዚህ መሠረት የሕዋስ luminescence ጥንካሬ በሁለት እጥፍ ይቀንሳል።
የሚባዙ ሴሎችን የሚለዩበት ሌሎች መንገዶች አሉ፡
- ዲኤንኤ የሚይዙ ቀለሞችን መጠቀም (ፕሮፒዲየም አዮዳይድ)፤
- የተሰየመ የኡራሲል አጠቃቀም፤
- የጨመረው የሳይክሊን ፕሮቲኖች አገላለጽ ደረጃ መመዝገብ፣ እነሱም በሴል ዑደት ቁጥጥር ውስጥ የሚሳተፉ።
